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蛋白质测定方法的比较

来源:  类别:技术文章  更新时间:2009-03-12  阅读

蛋白质的定量,是生物化学中最常用、最基本的分析方法之一。目前常用的有以下几种方法:定氮法、紫外吸收法、Lowry法(Folin-酚试剂法)、Bradford法(考马斯亮蓝法)、BCA法等:

定氮法比较繁复,但较准确,往往以定氮法测定的蛋白质作为其他方法的标准蛋白。
紫外吸收法简便、灵敏、快速,不消耗样品,测定后样品仍能回收利用。缺点是准确度较差,干扰物质多,用标准曲线法测定蛋白质含量时,对于那些与标准蛋白中酪氨酸和色氨酸含量差异大的蛋白质,有一定的误差。
Lowry法是较早发展的一种灵敏的检测方法,最低灵敏度为5微克,通常测定范围20-250微克。优点是灵敏度高,缺点是费时较长,要精确控制操作时间,标准曲线不是严格的直线形式,且专一性差,干扰物质较多。
Bradford法是灵敏度更高的一种方法,优点有:灵敏度高,比lowry法高4倍左右,最低检测达1-5微克;测定快速、简便,染色稳定;干扰物质少。确点是用于不同蛋白质测定时有较大的偏差;仍有干扰,如SDS、去污剂、Triton x100等;标准曲线有轻微的非线性。

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