盐溶蛋白电泳鉴定玉米种子纯度应注意的问题

赵娟(新乡市农业科学)

玉米种子纯度盐溶蛋白电泳鉴定较传统的生态方法具有速度快、准确可靠、成本低廉、技术比较容易掌握等优点，在检验工作中应用广泛。但它涉及到化学、生化、遗传学和植物学等多方面的知识，测定操作步骤较为繁琐，在实际操作中往往会出现一些问题．影响鉴定的正常进行。下面结合多年在实践工作中的经验和教训，现将电泳操作中应注意的问题叙述如下，供同行参考。

1 溶液配制中需注意的问题

此过程需用化学试剂配制多种操作溶液，化学试剂的纯度和质量直接影响到所配溶液的浓度，进一步影响到实验结果。因此，所用试剂(丙稀酰氨、N—N’亚甲基双丙稀酰氨、氯化钠等)均为分析纯。若不易买到分析纯，应注意购买大厂生产的合格的化学纯试剂，并根据其溶解度的好坏适当增加试剂比例。各溶液应按配方认真称量，严格配制。所有溶液应装在棕色瓶中置冰箱贮藏室保存。由于个别试剂容易失效，如硫酸亚铁、抗坏血酸、过氧化氢等，其溶液一般应在两周内使用或现用现配。

注意，有些试剂具有毒性或腐蚀性，如丙烯酰胺、N—N’—亚甲基双丙烯酰胺、三氯已酸、过氧化氢，使用时应小心操作。

2样品提取需注意的问题

取样要有代表性，随机取样，不能取霉烂、变质、虫蛀或病粒种子，以防由于蛋白质变性和异种蛋白影响实验结果。样品粉碎时．每粉碎一粒种子应将粉样器上的种子粉末擦净，避免子粒间交叉污染。提取液加入后应充分摇匀，提取期间至少摇两次。样品提取时间不宜太长，一般不超过4h。

3凝胶制备需注意的问题

玻璃板一定要洗净、擦干，否则，电泳凝胶会粘在玻璃板上难以剥离。另外，电泳槽的四个固定螺丝用力要一致，否则会出现凝胶厚度不匀或者漏电极液现

象。

凝胶配制时应严格配比，均匀一致，避免出现凝胶速度太快或凝胶不聚合现象。灌胶时要充分摇匀，迅速从一端灌人，避免产生气泡和凝胶不匀。封分离胶时动作要轻，以免冲环胶面，造成胶面不平。样品梳要插平，拔出时要小心轻拔。

4加样电泳需注意的问题

加样量应保持准确一致。太多，谱带不清；太少，可能丢失某些谱带。每点一个样品要用去离子水清洗进样器二三次，防止交叉污染。电泳时电极勿接反。电泳温度一般在15～20℃。

5染色观察需注意的问题

取胶板时要小心操作。若有粘板现象，是玻璃板没洗干净或是玻璃板划伤发毛，应更换。

染色时，染色液可重复使用2次。但需再适量补加三氯已酸和考马斯亮兰R250-乙醇溶液。

6谱带分析需注意的问题

在品种电泳鉴定时，应首先在Ζ区寻找其特征谱带，必要时观察另外两区的谱带作为辅证。

注意用标准种子或该品种的标准图谱带进行对照。如果没有找到标准种子或标准图谱的玉米杂交种，在电泳时最好用其亲本自交系种子进行对照。若样品谱带具有一对以上双亲的互补型谱带(杂交种的一条谱带和父本自交系的一致，另一条同母本自交系的一致，则这两条谱带称作互补带)，则该样品为两亲本杂交制成的杂交种；若样品谱带与两亲本谱带无互补关系，则该样品可能是异品种；若样品谱带与某一亲本谱带完全一致，则该样品为亲本种子。