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种子DNA提取仪对云南紫苏的种子DNA提取

来源： http://www.top17.net/ 　类别：技术文章　更新时间：2015-11-14　阅读次

　　云南各地收集到20份紫苏品种并进行了多年的栽培和经济性状评估,发现在紫苏种内存在着丰富的遗传变异,并且已用形态聚类分析的方法对云南境内紫苏的种下变异进行了探讨,将其分为5个变种。由于形态特征是基因型和环境相互作用的产物,紫苏的形态聚类分析结果仅从表现型上间接地反映出了云南境内紫苏的遗传多样性。试验以云南紫苏种子为材料,研究了紫苏基因组DNA的提取和RAPD引物筛选,为从DNA多态性角度直接揭示云南紫苏的遗传多样性奠定了基础。种子DNA提取仪是对种子DNA进行提取的重要仪器。
　　
　　种子DNA提取仪在该研究中发挥了重要的作用，紫苏种子DNA的提取参照改进的提取烟草DNA的CTAB法,略有改动,试剂均为国产分析纯。取0.1～0.2g种子,置于经-20℃冰箱降过温的研钵中磨碎,转入1.5mL的离心管中,加入0.35mL的55℃预热过的1×DNA提取液(50mmol/LTris-HClpH7.5,10mmol/LEDTApH8.0,0.7mmol/LNaCl,1%β-巯基乙醇,1%CTAB),3min后加入2×DNA提取液(浓度为前者的两倍),放入55℃培养箱中过夜,其间颠倒数次,加入0.7mL饱和酚,在自制的混匀器(2r/min)上混匀抽提3h,6000r/min下离心10min,将上清液转入至另一管中,加入0.35mL饱和酚和0.35mL氯仿-异戊醇(24∶1)抽提2h,6000r/min下离心10min,取上清液至另一管中,加入0.7mL氯仿-异戊醇(24∶1)抽提2h,6000r/min下离心10min,取上清液至另一管中,加入0.07mL3mol/LNaAc和0.7mL异丙醇,室温下沉淀30min,3000r/min下离心5min,弃上清液,用70%酒精洗涤DNA,晾干后加入100μLTE溶解。
　　
　　在植物分子标记研究中,种子DNA提取仪提取基因组DNA一般都以新鲜的幼嫩叶片作材料,极少见到用成熟种子作材料提取基因组DNA的报道。由于紫苏叶片含有丰富的紫苏色素和酚类物质,不经特殊处理很难获得高质量的基因组DNA,于是我们尝试用紫苏种子作材料,用改良的CTAB法来提取紫苏的基因组DNA.