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高通量组织研磨仪分析南瓜杂交种纯度

来源： http://www.top17.net/ 　类别：技术文章　更新时间：2015-07-22　阅读次

　　在水稻、玉米、大豆、油菜等重要农作物上,SSR标记技术已成为一种普遍采用的纯度鉴定方法。SSR标记由于具有数量丰富，多态性高，共显性遗传，操作简便，结果稳定可靠等优点,已成为当今作物品种纯度鉴定的理想标记类型。且快速简便SSR检测方法也被研究建立起来，"南瓜SSR标记开发较迟,目前主要用于遗传连锁图谱的构建，基因定位等基础研究方面,而在应用研究上较少。高通量组织研磨仪可以在研究制样品种发挥重要的作用。
　　
　　将种子浸种lh后,置于垫有滤纸的发芽盒,37e,并注意保湿"发芽5一6天左右,取单粒发芽种子的胚轴约.05cm,放到.20mL离心管中,高通量组织研磨仪研碎;加入600林LCATB提取液,65e水浴10mni;加入等体积氯仿:异戊醇(24:1),充分倒置混匀约10min,于120001丫11〕in离心10min;取上清液,加等体积预冷的异丙醇混匀(轻轻倒转),于常温下放置约30min,1200Or力1〕in离心10min;弃上清液,倒置使其自然风干或置于超净工作台让其吹干,加入适量ddHZO溶解备用"
　　
　　通过高通量组织研磨仪的参与研究，简便SSR检测体系比常规SSR检测体系更简单实用,但也存在提取的基因组DNA量较少!不易于长时间保存的缺点"此外,虽然本研究所用的检测体系相对于常规检测体系大大减少了试剂用量,但理论上,在保障点样量的前提下,还可将PCR反应体系进一步减小;为提高检测效率,还可探索采用多重PCR,以便同时检测多个位点的差异,因此,扩增体系还可进一步优化"在电泳检测时,本研究仅点样1次,对于合适引物的扩增产物,可以探索点样2次甚至多次,以便节约制胶成本,这方面的工作尚需根据扩增产物大小进一步摸索。