粗脂肪酶活力的测定方法的研究

来源：本站　类别：技术文章　更新时间：2010-06-19　阅读次

脂肪酶又称甘油酯水解酶, 它能催化甘油三酯水解生成甘油二酯或甘油一酯或甘油和脂肪酸。粗脂肪酶由于保存不当或放置时间较长, 常常会使活力下降, 因此, 使用时必须对粗脂肪酶活力进行测定。检测脂肪酶活力的方法有很多种, 所使用的底物也很多, 各有优缺点。目前为止, 还没有一种统一的检测手段, 各生产厂家和科研部门通常根据自己的实验条件来制定各自的检测方法。反映脂肪分解程度的指标有酸价、碘价、皂化价、过氧化值等。本实验用酸价作指标, 用95%乙醇作终止剂, 通过酸价的测定反映脂肪酶分解脂肪的程度, 从而求得酶活力。旨在探讨一种新的快速的测定粗脂肪酶活力的一种方法。

1　材料与方法

1.1　实验材料

1.1.1　食用色拉油: 市售

1.1.2　生物试剂

粗脂肪酶，标准脂肪酶；

1.1.3　化学试剂

酚酞指示剂95%乙醇溶液0105 mol/LNaOH溶液

1.1.4　主要仪器设备

电热恒温水浴锅　微量滴定管　电子天平 SZF-06A粗脂肪测定仪纤维测定仪

1.2　方　　法

1.2.1　粗酶液的制备

用电子天平分别称取粗脂肪酶0.010 g、0.020 g 和0.030 g, 用蒸馏水溶解并定容至100 mL, 配成浓度分别为0.01%、0.02% 和0.03%的粗酶液。

1.2.2　实验设计

本实验以10 mL色拉油为底物,以酶用量、水解温度、反应时间为因素,通过酸价的测定选定其水解的最佳条件。正交实验设计见表1和表2。

1.2.3　酸价的测定

酸价是指中和1 mol游离脂肪酸所需NaOH的毫克数, 它用于衡量油脂的水解程度。实验中用酸碱滴定法测定水解液的酸价, 参照文献中所使用的方法, 向所得的水解液滴加1 mL 95%的乙醇溶液, 摇匀, 终止反应, 并加入2滴酚酞指示剂, 迅速用0105 mol/L的NaOH溶液滴定至溶液呈微红色, 在30 s内不消失为终点, 记录消耗的NaOH溶液毫升数(V ) 。用同样的方法测定空白值, 每个试验重复两次, 以平均值作为测定结果。

酸价按下式计算:

X = C (V - V0 ) ×40 /M

式中: X —油脂酸价(mgNaOH /g油)

C—NaOH标准溶液的浓度(mol/L)

M —试样的质量( g)

40—NaOH的mmol质量(mg/mmol)

1.2.4　粗脂肪酶活力的测定

在最佳水解条件下, 分别测得粗脂肪酶和标准脂肪酶水解液的酸价X1、X2 , 根据公式U1 /U= X1 / X2求得粗脂肪酶的活力, 其中U1为粗脂肪酶活力, U为标准脂肪酶活力。

1. 2. 5　标准脂肪酶液的配制

根据实验最佳条件, 配制标准脂肪酶液。

2　结果与分析

2.1　最佳水解条件的选定