海洋微藻粗脂肪、EPA 和DHA 含量的测定

在自然界中,能够合成EPA 和DHA 的生物只有部分海洋微藻和少量细菌,其中海洋微藻作为海洋生态体系中的主要初级生产力,通过食物链为高级的动物直接或间接提供多不饱和脂肪酸,其中鱼体内的EPA 和DHA 即是通过食用海洋微藻而获得的。因此,研究海洋微藻中EPA 和DHA 的含量有重大意义。该文就八种海洋微藻中EPA 和DHA 含量做一分析测定,为海洋微藻的开发利用提供依据。

1 　材料和方法

1. 1 　材料

实验用的微藻为1 号三角褐指藻(Phaeodactylumtricornuru) ,2038 ;2 号中肋骨条藻(Skeletonema costa2tum) , 2042 ; 3 号新月菱形藻(Nitzschia closterium) ,2034 ; 4 号等鞭金藻(Chrysophyceae isochrysis galba2na) ,3011 ;5 号绿色巴夫藻(Pavlova viridis) ,3012 ;6 号小球藻(Chlorella miutissima ) , 1014 ; 7 号微拟球藻(Nannochloropsis oculata) ,1001 ; 8 号紫球藻( Porphy2ridium cruentum) ,8001 ,;培养液采用fP2 加富的米勒氏工人海水; 实验所用的试剂均为分析纯;721 可见分光光度计;离心机;电热恒温水浴锅;sp6800a 型气相色谱仪；SZF-06B粗脂肪测定仪、粗纤维测定仪。

1. 2 　方法

1. 2. 1 　微藻培养方法　自然光照, 平均光强为6000LX,亮暗比为16∶8 ,静止培养,每天定时摇晃两次。温度23 ±2 ℃。

1. 2. 2 　收获　对数生长期末期收获,测定OD680 ,4000rPmin 离心,藻体真空干燥后称重备用。

1. 2. 3 　样品制备方法　离心好的藻体按Bligh - Dy2er 方法〔2〕提取脂肪,减压蒸馏并迅速称重后转移到25mL 磨口试管中用N2 将溶剂吹干后, 加入5mL2molPL 的氢氧化钾2甲醇溶液充N2 后密封。置于75 ℃水浴中酯化40min ,冷却后加入正己烷(分两次)提取脂肪酸甲酯。提取液转移到5mL 锥形具塞离心管中,用N2 吹干后,加入正已烷溶解后供色谱分析〔3～5〕。

1. 2. 4 　气相色谱分析　气相色谱分析条件:色谱柱为不锈钢填充柱(2m ×3mm) ,担体为洛母沙伯,填充16 %的DEGS。载气为N2 , 流速为30mLPmin , 不分流,恒温190 ℃。氢火焰检测器,温度为250 ℃。衰减为4 ,灵敏度为4。进样量为2μL 。脂肪酸的确定参照标准样品来进行,采用外标法定量。

2 　结果与讨论

2. 1 　粗脂肪含量

此实验微藻收获密度、生物量和粗脂肪含量如表1。绿藻门收获密度最高,其中小球藻收获OD6801. 372 ,生物量为491. 2mgPL ,粗脂肪为干重的26 %;而金藻门收获密度最低,生物量为61. 8mgPL ,但是粗脂肪含量最高为干重的57 %;硅藻门3 株微藻收获密度分别为0. 592 ,0. 710 ,0. 724 ,其中3 号藻具有最大的生物量为509. 4mgPL ,粗脂肪含量占干重的26 %; 红藻门的紫球藻个体较大, 其生物量为475. 6mgPL ,粗脂肪仅占干重的5 %。